马属动物主要传染病疫苗和诊断技术的研制与

素材｜哈兽研马病团队

编审｜张坤

导读

随着我国经济的高速发展和全面迈入小康社会，现代马业快速发展，马成为重要的竞技、娱乐、伴侣动物，同时，驴作为经济动物的需求日益增长，马业、驴业已然发展成为重要的一种经济和文化产业。我国现有马匹余万匹，驴余万头，近年来在新需求的推动下，养殖数量逐步增大，动物交易和调运频繁，导致各种传染病发生增多，给现代马业带来的巨大威胁。哈兽研马病团队面向产业疫病控制重大需求，针对重要马属动物传染病的诊断和疫苗开展集中攻关，研发出一系列国际先进的科技成果，为马业的健康发展和绿色养殖提供了可靠的、高效的科技支撑。该文主要介绍团队研发的3项疫苗、多项诊断试剂、标准化实验室认证下的检测系统、重大疫病监测现场快速诊断产品。

主要完成单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，国家马传染性贫血参考实验室，国家马鼻疽参考实验室

主要完成人：王晓钧，胡哲，郭巍，戚亭，刘荻萩

关于哈尔滨兽医研究所

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（简称“哈兽研”）马传染病和慢病毒病研究创新团队（简称“马病团队”）70年来专注马传染病的研究，是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室，世界动物卫生组织OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上，团队早期领导人兽医免疫学家中国工程院沈荣显院士研制成功了马传染性贫血病毒弱毒疫苗，成功控制了该病在国内的流行，并获得国家技术发明一等奖。

关于项目完成人

王晓钧，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究员，博士生导师。

马传染病和慢病毒病研究创新团队首席科学家。国家特支计划科技创新领军人才，国家首届优秀青年基金获得者。兼任兽医生物技术国家重点实验室副主任、国家马传染性贫血参考实验室主任、国家马鼻疽参考实验室主任、世界动物卫生组织（OIE）专家、OIE马传染性贫血参考实验室主任、全国动物防疫专家委员会委员、全国病毒学专业委员会青年病毒学委员会副主任委员、中国畜牧兽医学会马学分会副理事长、中国马业协会理事、全国动物卫生标准委员会委员等职。一直从事马属动物传染病及慢病毒病研究。主要研究方向为病毒与宿主天然免疫相互作用机制及马属动物传染病的防控策略。近年来在PLOSPathogens、JVI、JBC等国际著名同行评议期刊发表SCI科研论文60余篇，主编参编专著7部。获得中国农业科学院杰出科技创新奖等奖项4项，主持科技部、农业部和国家自然基金项目多项。

项目简介

01

重要马属动物疫苗的研制

马流感灭活疫苗（H3N8亚型，XJ株）

马流行性感冒(Equineinnuenza)简称马流感简称马流感，是由流行性感冒病毒引起的马属动物的一种急性暴发式流行的传染病，临床特征为发热、咳嗽、流鼻液、母马流产等，世界动物卫生组织已将其列为B类疫病。

马流感灭活疫苗（H3N8亚型，XJ株）系用马流感病毒A/equine/XinjiangFuyun/3/07（H3N8）株（XJ株）接种易感鸡胚，收获感染鸡胚液，经纯化及β-丙内酯灭活后，与新型佐剂混合乳化制成。用于预防由H3N8亚型马流感病毒引起的马流感。其适用于不同品种6月龄以上马，加强免疫后7～14日产生免疫力，通过颈部肌肉注射，每次2mL。首免后4周加强免疫，以后每半年免疫1次。目前研究成果正在进行新兽药注册证书注册。

马流产沙门氏菌灭活疫苗（CGMCCNo.）

马流产沙门氏菌病又称为马副伤寒，是由马流产沙门氏菌引起的以马属动物流产为特征的传染病，只对马属动物具有致病性。

马流产沙门氏菌灭活疫苗（CGMCCNo.）系用马流产沙门氏菌（S.Abortusequi）.HAES.G株培养并灭活后与新型佐剂混合乳化制成。用于预防由马流产沙门氏菌引起的妊娠马的流产及幼驹副伤寒。其适用于不同品种及日龄马，通过颈部肌肉注射，每次1mL。春秋季免疫，一年2次。目前该成果完成实验室研究，已经进入临床试验申报阶段。

驴沙门氏菌流产灭活疫苗（CGMCCNo.）

驴沙门氏菌流产又称驴副伤寒，是由马流产沙门氏杆菌引起的马属动物的一种传染病。临床特征是孕畜发生流产；公畜表现为睾丸炎、鬐甲肿；幼驹主要表现为关节肿大、下痢，有时还见支气管肺炎。

成果系用马流产沙门氏菌驴源（S.Abortusequi）.DDE.X株培养并灭活后与新型佐剂混合乳化制成。用于预防由马流产沙门氏菌驴源株引起的妊娠驴的流产及幼驹副伤寒。在小鼠和驴的保护率达到95%以上。适用于不同品种及日龄驴，通过颈部肌肉注射，每次1mL。春秋季免疫，一年2次。目前该成果完成实验室研究，已经进入临床试验申报阶段。

沙门氏菌马流产活疫苗C

该研究成果系我国20世纪80年成功研制的用于预防沙门氏菌流产的活疫苗。鉴于目前马流产的大范围流行，本研究团队于年与哈尔滨维科生物有限公司合作，将该项疫苗恢复生产，取得了正式生产文号，该成果适用于预防马、驴流产，每年免疫2次。

02

马属动物主要传染病检测试剂盒

马属动物主要传染病主要包括有：马流感、马传染性贫血（马传贫）、马鼻肺炎（马疱疹病毒I型和IV型感染）、马动脉炎等病毒性传染病，以及马流产沙门氏菌病、马腺疫等细菌性传染病。临床样品检测主要包括血清学和病原学检测。马病团队具备全面、系统化的检测平台，对于国家急需、行业有重要需求的相关疫病诊断方法已经陆续形成商品化的试剂盒、逐步推向市场。

马传染性贫血病毒抗原、阳性血清与阴性血清试剂盒

马传染性贫血病：简称马传贫，是我国的二类传染病，引起的马、骡、驴传染病。其特征主要为间歇性发烧、消瘦、进行性衰弱、贫血、出血和浮肿；在无烧期间则症状逐渐减轻或暂时消失。该病一旦感染将终身带毒。该病的诊断主要以血清学检测为主。

该成果系马传贫琼脂扩散试验所需试剂产品，用于检测马传贫病毒抗体。琼脂扩散试验是马传贫诊断的金标准，该方法通过观察抗原与抗体形成的沉淀线进行结果的判定，具有检测快速（12小时出沉淀线，国外试剂盒需要48小时）、沉淀线更清晰、易于判读、特异性更高等特点。

马传染性贫血病毒cELISA抗体检测试剂盒

该成果系采用体外表达马传贫病毒的保守蛋白和马传贫特异性单克隆抗体创制的竞争ELISA抗体检测试剂盒，用于马传贫特异性抗体的检测，适合于流行病学监测、疾病初筛和确认。它具有操作简便、无需稀释样品、反应快速（1.5小时内完成96次反应）、高通量（同时试验可在3小时内完成次反应），检测敏感性高，可用于马传贫的大规模筛查。

马流产沙门氏菌iELISA抗体检测试剂盒

马流产沙门氏菌引起的马属动物流产，40多年前曾在我国大规模流行，之后的几十年里发病率较低，直到近几年，该病卷土重来，引起大规模马流产和驴流产的暴发，但相关的检测技术和手段一直停滞不前，无法满足疫病监测的需要。我国行业标准指定试管凝集试验用于检测该病抗体，但是该方法特异性不强，敏感性较低，操作过程耗时费力、结果不易判定。为了提高检测效率，马病团队研发了新型的iELISA抗体检测试剂盒。

该成果系马流产沙门氏菌特异性抗体检测试剂盒，用于马、驴流产疑似抗血清的检测，是目前国际上首创的可用于马流产沙门氏菌特异性抗体检测的试剂盒，具有特异性强、敏感性高、重复性好等特点，可实现样品的高通量、快速检测。

H3N8亚型马流感病毒HI试验抗原、阳性血清与阴性血清试剂盒

马流感是影响马业的重要传染病。该病以高热、流涕、咳嗽、沉郁等为典型症状，春秋季节多发，传播范围广、速度快，可造成一定的死亡率。血凝抑制（HI）实验是马流感病毒抗体检测的金标准。

此系H3N8亚型马流感病毒血凝抑制（HI）试验所需试剂产品，HI方法是流感病毒抗体检测的金标准，该方法通过检测血清的血凝抑制能力进行流感抗体水平的判定，具有特异性高、成本低、保存期长等特点。

非洲马瘟病毒一步法荧光RT-qPCR核酸检测试剂盒

非洲马瘟是由非洲马瘟病毒引起的马属动物的一种急性或亚急性传染病。OIE将其列为A类疫病。非洲马瘟病毒现已知有9个血清型，各型之间没有交互免疫关系。我国尚无本病发生。年，泰国和马来西亚相继暴发该疫情，引起我国高度重视。为防范该病传入我国，马病团队迅速推出了该病的核酸检测试剂盒。此系非洲马瘟病毒RNA一步法快速检测试剂盒，无需先将病毒RNA反转录成cDNA，再进行荧光PCR扩增，可以直接以病毒RNA为模板，进行一步法扩增鉴定，是目前世界动物卫生组织（OIE）指定的检测方法，可以对该病进行定性分析，检测特异性好，敏感性高，最低可以检测10个拷贝/微升的核酸样品，重复性良好。

常见马病毒病核酸检测试剂盒

马流感病毒、马动脉炎病毒、马传染性贫血病毒、日本脑炎病毒均属于RNA病毒，针对上述4种病毒均推出了一步法荧光PCR快速检测试剂盒（探针法），可以省去RNA反转录为cDNA的步骤，操作简便、避免污染。I型马疱疹病毒、IV型马疱疹病毒均属于DNA病毒，针对马鼻肺炎的这两种病原推出了单管双重荧光PCR检测试剂盒（探针法），仅一个反应可同时检测两种病原的核酸DNA。

常见马细菌病核酸检测试剂盒

主要包括马流产沙门氏菌、马腺疫链球菌、马大肠杆菌、马放线菌、马鼻疽、马红球菌等的PCR或荧光PCR检测试剂盒。

马寄生虫病核酸检测试剂盒

主要包括伊氏锥虫PCR检测试剂盒、马泰勒虫（巴贝斯虫）PCR检测试剂盒、马焦虫（驽巴贝斯虫）PCR试剂盒等。

03

重要疫病的现场体外快速检测试剂盒

马传贫抗体检测胶体金试纸条

可实现10分钟快速检测马传贫抗体，通过试纸条可视化条带进行判定。该方法特异性好，与金标准琼扩试验相比，阳性符合率为94.44%，阴性符合率为99.07%。

马传贫抗体检测荧光微球检测卡

可实现10分钟快速检测马传贫抗体，通过RS荧光免疫定量分析仪直接读取阴阳性结果。

现场快速核酸检测系列

非洲马瘟病毒、马流感病毒、马流产沙门氏菌核酸检测试剂盒（等温扩增法）可实现20分钟快速检测病原核酸RNA或DNA,可通过小型便捷的等温荧光PCR仪直接读取结果。3种检测试剂盒均具有良好的特异性，敏感性与荧光定量RT-PCR或PCR的一致，方法可靠、稳定。

项目创新点

01

马流感灭活疫苗

该成果由我国马流感病毒流行毒株制备，是我国独立研发的马流感疫苗，疫苗制备过程采用全新的纯化技术，安全性高，免疫保护效果好。其面向我国马属动物传染病防控的产业需求，而且价格将远低于进口同类产品，将对我国马流感的防控起到重要作用。

02

马流产沙门氏菌灭活疫苗

该研发成果系具有国际领先技术的马流产的灭活疫苗，与国内新近恢复生产的沙门氏菌马流产活疫苗C相比，安全性更高，免疫保护效果更好，将对目前的马流产疫情提供可靠的科技支撑。

03

驴伤寒灭活疫苗

该研发产品系采用国际领先技术制备的用于预防马流产沙门氏菌引起的驴流产的灭活疫苗，应对我国集约化、规模化养殖驴业所面临的繁殖和疫病难题。该科研成果的成功研制对我国驴业发展有着重大的发展意义。

04

马病诊断产品

马传贫琼脂扩散试剂盒为国内独有的产品，抗原抗体沉淀线清晰度更高、反应时间从48小时降低到24小时，优于国外同类产品；马传贫cELISA抗体检测试剂盒为国内独有的产品，经香港渔农自然护理署的比对试验证明，敏感性和特异性均为%，近期在迪拜中央兽医研究实验室的比对试验表明，该试剂盒敏感性和特异性均为%，好于国际同类产品。马传染病系统化检测平台是由本团队依托于哈兽研兽医生物技术国家重点实验室，通过多年建设，结合系列的检测技术，建立的具有诊断病毒病和细菌病的病原学和血清学等综合检测平台。

应用情况

01

马流感灭活疫苗

马流感灭活疫苗（H3N8亚型，XJ株）已在我国新疆维吾尔自治区、黑龙江省、山东省完成临床试验，试验马总数达到匹，包括温血马、阿拉伯马、伊犁马、渤海马、英纯血、德保矮马、哈萨克马、蒙古马等8个品种。结果证明，马流感灭活疫苗（H3N8亚型，XJ株）具有很好的免疫效果，且能在免疫后6个月内为马提供良好的保护。其已在进行二类新兽药注册，将为我国马流感的防控提供了有力支持。

02

马传贫抗体检测试剂盒

马传贫琼扩试剂盒一直在我国马传贫消灭任务中扮演了重要的角色，cELISA试剂盒是新研发的诊断试剂，于年开始陆续在我内蒙古自治区、云南和新疆等地推广应用，取得了良好的市场反馈。

01

非洲马瘟等核酸诊断试剂盒

已在国内部分地区应用，为疫病预警与诊断提供了技术支持。

（文章发表于“中国科技成果\年\第20期”）

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