蓝耳灭活苗在阻止公猪通过精液排毒的效果初

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前言：

本期分享是发表在《JournalofSwineHealthandProduction》有关蓝耳灭活苗在公猪上应用效果的文章。

摘要：

7头PRRS抗原抗体阴性公猪，4头接种PRRSV灭活疫苗，3头作为未接种对照。在实验的32天期间，每周两次收集公猪精液样本用于评估PRRSV灭活苗对阻止精液排毒的效果。

PRRSV攻毒后14天通过间接免疫荧光抗体法(IFA)检测所有公猪抗体阳性。在攻毒后第4天首次采精时7头公猪抗原均为阳性。免疫印迹分析表明其中两头免疫公猪的抗体在很短的时间内就呈现阳性（分别在攻毒后4天和7天），与另外两头免疫公猪攻毒后25天和28天，未免组的3头公猪32天才检测到抗体相比要快很多。在实验结束时（第32天）收集的精液和组织样品中，免疫组未观察到因PRRSV引起的肉眼或显微病变，而且从生殖组织中尝试分离病毒均为阴性。这项初步研究表明，使用蓝耳灭活疫苗可减少精液的带毒排毒。

实验目的：

研究性成熟公猪感染PRRSV的过程；评估蓝耳灭活苗对攻毒前后血清抗体效价的影响;评估蓝耳灭活苗对病毒和病毒血症持续时间的影响，记录临床症状的病程;评估PRRSV感染后生殖系统和其他组织的病理变化。

Animalsandhousing

1.实验猪和实验场所

从两个蓝耳抗原阴性的猪群中随机7头8-12月龄公猪，随后通过IFA检测确认了蓝耳抗体阴性。这些公猪被圈养在一个大房间里，每窝2-3头。另外，还选了一些4-8周龄仔猪用来做PRRSV在活体感染路径研究所用，这些猪同样来自蓝耳阴性猪群，IFA检测PRRSV抗体阴性。这些仔猪在此之前没有和公猪、猪精有过任何接触，随后被转移到隔离设施并在整个实验观察期间都处在单独的隔离单元中。

Boarvaccination

2.公猪免疫

免疫组猪只均为随机选取，每窝里面选2头，共4头公猪（31号、32号、号、号）在攻毒前5周和2周肌肉注射蓝耳灭活苗2ml，另外3头作为不免疫对照。

Boarinoculation

3.人工攻毒感染

所有的这7头猪每个鼻孔接种2ml.5TCID50/mlPRRSV（ATCCVR）。这个毒株从美国一个蓝耳爆发场的病仔猪组织中分离，经斑点亲和纯化后使用。

Semencollection

4.精液采集

5头公猪成功训练人工采精（另外2头未成功），从攻毒前6周开始，每周采精2次，攻毒后继续采精5周。将精液处理后分装成4-5ml/份，-80℃保存备用。

Bloodcollection

5.血液采集

在免疫前每隔45天采血一次，连续采集3个月。4头公猪两次免疫当天和攻毒当天，包括对照组的3头共7头猪同时采血。攻毒后4天、7天、10天、14天和后续每周采血一次直到攻毒后的第32天实验结束时安乐死处理公猪。血清分离存放于-80℃用作免疫印迹分析和IFA检测。

Westernimmunoblotassay

6.免疫印迹分析并做了多次重复性验证

Tissuesamples

7.组织样本采集

安乐死后的猪只采集的器官组织包括:肺、脾、肾、股骨骨髓、输精管、附睾、睾丸、前列腺、精囊、球尾腺、包皮和阴茎，用于病毒分离和组织病理学观察。

PRRSVinsemen

8.精液PRRSV分析

精液中PRRSV的存在是通过猪活体感染研究来确定的。将单独饲养的未感染PRRSV的仔猪通过腹腔注射从单个公猪采集的带毒精液13-15ml。这些猪从腹腔注射当天和此后的每周采血并分离血清。这些血清连续两次及以上的IFA检测阳性即认为通过精液能感染并传播PRRSV，否则这些猪将在接种后随访5周。

Boars

1.公猪检测数据

4头免疫蓝耳灭活苗的公猪临床表现健康，7头中的6头在攻毒后临床表现健康，5头在攻毒后精神、食欲和性欲都正常的情况下采集精液。出现临床症状的那头公猪在攻毒后几天就表现为精神沉郁、厌食。这也是那两头不会爬跨假母台而采用电刺激采精的公猪之一，结合麻醉的副作用，肢蹄的潜在问题使这头猪很难站立。另外一头电刺激采精的公猪仍然保持临床健康。

攻毒前通过IFA检测这7头猪的血清，蓝耳抗体均为阴性。免疫蓝耳灭活苗的4头公猪和未免对照的3头公猪中的2头在攻毒后第10天通过IFA检测到抗体效价，在攻毒后32天时，这些猪的抗体效价均＞。

▲图1蓝耳灭活苗免疫组和未免对照组PRRS免疫荧光抗体平均滴度

从图1我们可以看出蓝耳灭活苗免疫组的抗体效价上升更快。到第21天时免疫组平均抗体效价是未免组的两倍。免疫印迹检测表明，除了蓝耳灭活苗免疫组的2头公猪在攻毒前当天检测到抗体阳性外，其余公猪在攻毒前均为阴性。免疫组31号和32号公猪在攻毒当天检测到的蓝耳特异性抗体分别为15kd、19kd。攻毒后的第4天，所有的7头公猪均呈现病毒血症，而未免对照组的1头公猪检测到病毒血症长达28天（表1）。剖检显示肉眼和组织学病变均不显著，收集的所有组织中检测PRRSV均为阴性。

◆表1攻毒后免疫组和未免对照组公猪血清中PRRSV的动态分布

PRRSVinsemen

2.精液PRRSV检测

在首次采精时即攻毒后第4天，所有的这7头猪均检测到了PRRSV。未免对照组公猪在攻毒通过精液持续排毒，直到第32天进行安乐死PRRSV仍为阳性，而免疫蓝耳灭活苗组的4头公猪分别在第4、7、25、28天时内精液PRRSV阳性，32天时已经转阴（表2），蓝耳灭活苗免疫组比未免对照组精液排毒时间明显缩短。

◆表2攻毒后免疫组和未免对照组精液中PRRSV的动态分布

以往的研究表明，即使在没有临床症状情况下，PRRSV感染公猪会通过精液在相当长的一段时间内排毒。Yaeger等的研究表明PRRSV可以通过自然污染的精液传染。综合这些研究表明，PRRSV污染的精液可能在将PRRSV传染给母猪的过程中扮演着重要角色。蓝耳带毒公猪长时间通过精液排毒和传播的方式与感染马动脉炎病毒（EAV）的种马通过精液排毒、通过交配传播EAV相似，EAV与PRRSV亲缘关系很近。已经证明种马接种EAV疫苗能减少或消除通过精液排毒并降低病毒载量。本项研究的目的是蓝耳灭活苗对缩短公猪病毒血症持续时间、减少精液排毒和血清抗体反应方面的的影响进行初步评估。

尽管本研究中使用的公猪数量较少，但检测数据表明蓝耳灭活苗免疫组与未免对照组公猪在攻毒后血清抗体反应方面存在差异。两组公猪几乎在同一时间产生IFA抗体效价，但蓝耳灭活苗免疫组明显更高。

如表1所示，这些数据表明蓝耳灭活苗免疫组病毒血症持续时间有下降趋势。免疫组和对照组各1头公猪病毒血症持续时间长，我们推测可能与电刺激采精和麻醉等应激因素有关。

直到实验结束即攻毒后第32天，未免对照组的3头公猪仍能通过精液排毒。这些结果与以往的研究和近期南达科他州立大学科研人员报道的感染PRRSV的公猪至少在21天内能通过精液排毒的研究结论一致。相比之下，两头蓝耳灭活苗免疫组的公猪（31和32号）快速产生免疫应答反应，经免疫印迹检测排毒时间非常短（分别是攻毒后4天和7天），而本研究的未免对照组的猪排毒时间要长很多（攻毒后32天），也比先前报道的通过精液排毒持续时间短（攻毒后13-43天）。综合分析这些研究信息我们发现蓝耳灭活苗免疫组的两头公猪通过精液排毒的时间明显缩短。实验组的这4头公猪通过精液排毒的时间明显短于未免对照组，而未免组直到实验结束仍在排毒。

PRRSV能通过精液传染对购买公猪或精液的生产者带来风险。公猪经IFA检测，不再有PRRSV病毒血症，但精液中仍能发现病毒。比如号和号公猪，通过IFA检测，在攻毒后7天已经没有病毒血症，这两头猪分别是攻毒后28天和32天仍能通过精液排毒。这意味着评估公猪是否长期排毒的唯一方法是看精液是否携带PRRSV。现实的问题是通过敏感细胞上培养分离PRRSV费用相对便宜，因而是商用领域常见方法，但是若想从精液中分离病毒并不敏感（即存在假阴性），通过PCR鉴定并分离可行但是费用高昂。

目前在美国获得许可的蓝耳减毒活疫苗(MLV)仅被批准用于仔猪。大量文献表明接种蓝耳减毒活疫苗的猪会出现较长时间的病毒血症，我们推断种猪也存在这种情况。而公猪可以在精液中传播存在感染力的PRRSV。虽然本研究的公猪数量较小，但结果表明蓝耳灭活疫苗能明显缩短PRRSV通过精液排毒的时间，这些结论为进一步研究开发蓝耳灭活苗应用于养猪领域提供了依据。预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇

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